一、实验准备

本实验将使用尊龙凯时代理的wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061。该试剂在生物医疗领域中广泛应用于蛋白质分析及多肽拼接。

二、单位定义

酰胺酶单位（AU）定义为在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺的酶量。计算公式如下：

AU/vial = [(a - b) / 25] × (1 / 962) × (40 / 01)

其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

为确保实验的准确性，请按照以下步骤操作：

1. 使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，避免样品中蛋白质的污染。
2. 采用质谱分析用凝胶染色试剂盒（如银染剂 MS试剂盒）进行电泳分离蛋白质样品。
3. 将凝胶中切割的蛋白质片段放置于微量离心管中。
4. 使用脱色溶液对凝胶进行脱色处理。
5. 向试管中加入300μL乙醇，并在搅拌器中振荡30分钟。
6. 移除乙醇，用Parafilm膜覆盖微量离心管，打孔以实现真空干燥15分钟。
7. 在100μL 10mmol/L DTT中溶解于100mmol/L碳酸氢铵，恒温56℃处理1小时。
8. 室温冷却后，加入等量的50mM碘乙酰氨溶液，并在暗处恒温45分钟涡旋处理。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 向凝胶片段中添加300μL乙醇，干燥15分钟。
11. 然后用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶液使凝胶片段膨胀15分钟，再次用300μL乙醇干燥15分钟。
12. 去除液相并真空干燥凝胶片段15分钟。
13. 使用100μL赖氨酸内切酶溶液于冰水浴中处理凝胶片段45分钟。
14. 去掉赖氨酸内切酶溶液，并将凝胶片段置于37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5条件下过夜。
15. 添加50μL 20mmol/L碳酸氢铵，振荡凝胶片段，重复3次以抽提多肽。
16. 接着使用5%甲酸/50%乙醇进行抽提，再次振荡3次。
17. 如有需要，可用SpeedVac浓缩多肽。
18. 利用ZipTip对多肽进行脱盐和纯化。
19. 如需，可使用弱真空浓缩多肽至2μL。
20. 最后，加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

欢迎咨询尊龙凯时的代理商——北京百奥创新科技有限公司，提供wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等优质产品，竭诚为您服务！